Diabetologia：激活但功用受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肾脏自身抗基底到消失1同型乳癌外科患者的令人满意率在成年人时期就有很好的刻画，多个肾脏自身抗基底非典同型的成年人中会有70%在血清叠加后10月内患上乳癌，而随访15年的成年人这一数量减少到84%。来得之下，占到外科1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的患病组态还无法得到必要的研究者。

更多的人开始应用于分期系统来假设1同型乳癌的令人满意：变异在消失多种肾脏自身抗基底时转到第1阶段性，消失血糖异常时转到第2阶段性，消失患者时转到第3阶段性。一些多发肾脏自身抗基底非典同型的变异，在1期和2期，令人满意较太快，并演进为患病的1同型乳癌。我们之前刻画了一分组在首次检验到多种肾脏自身抗基底样本后最少10年无乳癌的较太快令人满意者，这分组病患人数少，但特性非常明确。随后，我们发现肾脏自身抗原特异性CD8+T细胞膜重排在令人满意较太快的病患中会基本不共存，但在近期患病和一直共存的乳癌病患中会很容易检验到。这意味著暗示，与令人满意病患来得，这些病患自身免疫重排的抑制进一步提高。

早期研究者暗示，尽管抑制性T细胞膜(Treg)应用于量经常性，但乳癌病患共存一些新功能缺陷，其中会包含对IL-2的重排能力降低。此外，乳癌病患中会的现像CD4+T细胞膜意味著对抑制更具抵抗性，乏善可陈为现像T细胞膜的诱发减弱，自然环境转化成的Treg和基底外转化成的作用于Treg，以及抗原漫长的CD4+T细胞膜中会IL-2重排减弱。本研究者的目的是刻画了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在海岸边极较太快令人满意者中会的特性，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以这群人相结合的两端研究者，在21岁以下复发的病患家庭成员中会检查1同型乳癌的危险因素。我们之前刻画了一直较太快令人满意者的特性，他们保持多重肾脏自身抗基底非典同型超过10年，但无法消失乳癌的外科患者，太快性或非性新功能自身免疫。随后，10名一直保持无乳癌并愿意备有大量肝脏样本的较太快令人满意者归属于T和B细胞膜新功能生物信息学。在迄今的研究者中会，8名太快令人满意者(SP分组)，中会位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身抗基底非典同型。所有的自发性都始终保持1同型乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身抗基底对某些抗原的非典同型重排，然而，一名病患早已始终保持2期最少6年，但无法消失外科患者，一名病患被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采自实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据生物信息学中会对该供基底来进行了单独生物信息学。分开外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多模板流式细胞膜术和T细胞膜诱发试验生物信息学供基底中会Treg的增益、表同型和新功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和回归)来进行无委派聚类生物信息学，生物信息学Treg表同型。

结果：与身体健康供基底来得，来自太快令人满意基底的思绪CD4+T细胞膜的委派聚类结果显示，激来生的思绪CD4+ Treg增益减少，与持续性作用于的TNFR无关复合物(GITR)暗示减少有关。一名HbA1c升高的病患与令人满意较太快者和转换的依此分组来得，Treg小曲有所不同。新功能生物信息学暗示，与身体健康供基底来得，来自较太快令人满意基底的Treg介导的CD4+现像T细胞膜诱发值得注意受损。乏善可陈为对现像CD4+T细胞膜CD25和CD134暗示的诱发减少。

平面图1 深入的表同型生物信息学结果显示，CD4+Treg亚同型在太快令人满意队列中会减少。由FlowSOM转化的Treg二楼，聚集地在来自所有供基底的来生CD4+CD45RA -细胞膜上。根据记号物暗示鉴定出10个元簇:思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)应用于9个不同Treg记号转化的10个元簇的MST。每个终端亦然一个集群(100个集群)，极大的元集群(10个元集群)在终端分组周围制做。每个终端中会的粥平面图对此单个记号的暗示等级。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整基底记号暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)相较同位素为每个metacluster装有本站平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP分组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞膜(l)。深橙色橘色亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选大写秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模同型证实，Treg增益的减少是令人满意较太快的字样。分级门控(a - f)和柑橘生物信息学(g-k)比较SP自发性和转换的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR暗示来进行分开，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及供基底SP 606(深橙色)中会CD25+ cd127的增益简介平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装有本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示其中心平面图例，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列错综复杂的不同。(j)装有本站平面图结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较同位素(数量)。(k)灰度结果显示每个簇的表同型(粉红色)和Treg记号相较暗示与背景暗示(橙色);上列，文件系统Treg_3;下面几天后，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中会记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选大写秩检验

平面图3 与身体健康献血者来得，令人满意较太快者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T细胞膜元簇(思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个暗示记号的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)的FlowSOM GITR暗示串联，结果显示灰度(c)和简介平面图(d)。Wilcoxon筛选大写秩和检验，p< 0.07(深橙色)所有供基底包含，p< 0.05(橙色)供基底SP 606和转换的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)串联，结果显示灰度(e)和简介平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选大写秩检验

平面图4 来自较太快令人满意的CD4+ treg细胞膜依靠现像CD4+T细胞膜的能力降低。SP分组用橙色的本站和橘色对此，HD分组用黑色的本站和橘色对此，深橙色的本站/橘色对此供基底sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被记号为CFSE, Treg按推论的数量校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞膜，培育3过后来进行流式细胞膜术检验。(a-d)与CD4+接收者者相较应的treg培育(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。应用于非典同型依此(激来生的号召细胞膜不含treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差生物信息学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现像CD4+T细胞膜对较太快令人满意的T细胞膜酪氨酸的诱发更寻常。SP分组用橙色的本站和橘色对此，HD分组用黑色的本站和橘色对此，深橙色的本站/橘色对此供基底sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel记号，treg按推论的数量校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞膜，培育3过后来进行流式细胞膜术(CD25反染)和细胞膜因子生物信息学。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同完成培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差生物信息学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们推论的论断是，来自较太快令人满意子的酪氨酸思绪CD4+Treg在GITR暗示中会得到了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1同型乳癌危险性变异中会的值得注意的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28