Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1HG糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次造浮现家兔自身抗基底到造浮现1标准型冠心病流行病学疼痛的令人满意赴援在学龄前时期就有比较好的揭示，多个家兔自身抗基底非典型的学龄前中所有70%在血清转换后10年内患病冠心病，而随访15年的学龄前这一人口比例减愈来愈少到84%。相较之下，占流行病学1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的复发机制还未想得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用于依此系统来定义1标准型冠心病的令人满意：群基底在造浮现多种家兔自身抗基底时进入第1阶段，造浮现血糖造浮现异常时进入第2阶段，造浮现疼痛时进入第3阶段。一些多发家兔自身抗基底非典型的群基底，在1期和2期，令人满意较愈来愈慢，并发展为复发的1标准型冠心病。我们先前揭示了一分组在首次侦测到多种家兔自身抗基底样本后极其愈来愈少10年无冠心病的近于愈来愈慢令人满意者，这分组高血压人数愈来愈少，但相似性极其一致。随后，我们发现家兔自身肝细胞免疫CD8+T细胞核催化在令人满意加速的高血压中所也就是说不存在，但在近期复发和或多或愈来愈少的冠心病高血压中所很容易侦测到。这显然说明，与令人满意高血压相较，这些高血压自身特异性的缓冲弱化。

早期研究成果说明，尽管缓冲性T细胞核(Treg)数量正常，但冠心病高血压存在一些功用瑕疵，其中所都有对IL-2的催化能力减少。此外，冠心病高血压中所的effectCD4+T细胞核显然对缓冲愈来愈具抵抗性，发挥为effectT细胞核的减缓减弱，共存显现造出的Treg和基底外显现造出的诱导Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞核中所IL-2催化减弱。本研究成果的目的是揭示了CD4+缓冲性T细胞核(Treg)在一小群近于加速令人满意者中所的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方式：BOX研究成果是一项以这群人为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的高血压直系亲属中所检查1标准型冠心病的生命危险因素所。我们先前揭示了长期加速令人满意者的相似性，他们保持稳定多重家兔自身抗基底非典型超过10年，但未造浮现冠心病的流行病学疼痛，愈来愈慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无冠心病并不愿提供大量血液样本的加速令人满意者纳入T和B细胞核功用归纳。在现阶段的研究成果中所，8名愈来愈慢令人满意者(SP分组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗基底非典型。所有的分组织者都属于1标准型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后保住了家兔自身抗基底对某些肝细胞的非典型催化，然而，一名高血压已经属于2期极其愈来愈少6年，但未造浮现流行病学疼痛，一名高血压被病因为冠心病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中所对该供基底透过了单独审核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，选用多常量流式细胞核术和T细胞核减缓试制审核供基底中所Treg的阈值、表标准型和功用。用于FlowSOM和CITRUS(聚类认定、也就是说和紧接)透过无指派聚类归纳，审核Treg表标准型。

结果：与生活品质供基底相较，来自愈来愈慢令人满意基底的梦境CD4+T细胞核的指派聚类标示造出，激来时的梦境CD4+ Treg阈值减愈来愈少，与持续性诱导的TNFR相关细胞(GITR)表示减愈来愈少有关。一名HbA1c升高的高血压与令人满意加速者和匹配的对照分组相较，Treg谱各有不同。功用归纳说明，与生活品质供基底相较，来自加速令人满意基底的Treg介导的CD4+effectT细胞核减缓明显受损。发挥为对effectCD4+T细胞核CD25和CD134表示的减缓减愈来愈少。

左图1 深入的表标准型归纳标示造出，CD4+Treg亚标准型在愈来愈慢令人满意队列中所减愈来愈少。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有供基底的来时CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物表示认定造出10个元簇:梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用于9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个链表均是由一个协同(100个协同)，较大的元协同(10个元协同)在链表分组周围上色。每个链表中所的糕左图透露单个标识的表示高至。(b)每个元聚类的热左图，以标示造出整基底标识表示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充左图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相当丰度为每个metacluster盒线左图(丰度> 0.05%)考虑到为HD和SP分组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞核(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞核(l)。橘色边框均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一分组符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg阈值的减愈来愈少是令人满意加速的字样。分级旁路(a - f)和甜菜归纳(g-k)相当SP分组织者和匹配的HD分组织者在CD4+CD45RA−T细胞核上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的均是由性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR表示透过分离，仿真FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(布氏)分组以及供基底SP 606(橘色)中所CD25+ cd127的阈值简介左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路开集的盒线左图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示气压着色，箭头突造出的簇被标识为SP和HD队列之间的不同。(j)盒线左图标示造出了在SP(布氏)和HD(灰点)分组中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相当丰度(人口比例)。(k)插值标示造出每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标识相当表示与时代背景表示(紫色);上列，线程Treg_3;上头一行，线程Treg_4。时代背景与所有其他簇中所标识的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一分组符号秩检验

左图3 与生活品质献血者相较，令人满意加速者梦境treg的GITR减愈来愈少。每个梦境CD4+T细胞核元簇(梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表示标识的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表示热左图(sp606不都有在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表示串联，标示造出插值(c)和简介左图(d)。Wilcoxon一分组符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有供基底都有，p< 0.05(紫色)供基底SP 606和匹配的HD不都有在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表示，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)串联，标示造出插值(e)和简介左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一分组符号秩检验

左图4 来自加速令人满意的CD4+ treg细胞核控制effectCD4+T细胞核的能力减少。SP分组用紫色的线和边框透露，HD分组用紫色的线和边框透露，橘色的线/边框透露供基底sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(应答者)被标识为CFSE, Treg按辨别的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞核，培养出来3过后透过流式细胞核术侦测。(a-d)与CD4+应答者相当应的treg培养出来(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓平均值。用于非典型对照(激来时的响应细胞核仅有treg)计算减缓平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

左图5 effectCD4+T细胞核对加速令人满意的T细胞核来时化的减缓愈来愈脆弱。SP分组用紫色的线和边框透露，HD分组用紫色的线和边框透露，橘色的线/边框透露供基底sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标识，treg按辨别的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞核，培养出来3过后透过流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分赴援(b)。(c,d) CD25减缓百分赴援(c)和CD134减缓百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中所的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

假设：我们得造出的假设是，来自加速令人满意子的来时化梦境CD4+Treg在GITR表示中所想得到了扩展和丰富，特别强调了促使研究成果Treg在1标准型冠心病风险群基底中所的区别性的前提。

原文造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28