Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身血清到注意到1DF高血压诊疗病征的实质性百余人在成年人时期就有很好的刻画，多个呼吸道自身血清阴性的成年人中会有70%在血清类比后10年内患病高血压，而随访15年的成年人这一比百余人提高到84%。相比较之下，占诊疗1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的发病机制还并未得到适当的深入研究。

来得加多的人开始适用分期弟系统来判别1DF高血压的实质性：社会阶层在注意到多种呼吸道自身血清时转回第1阶段，注意到血糖出现异常时转回第2阶段，注意到病征时转回第3阶段。一些多发呼吸道自身血清阴性的社会阶层，在1期和2期，实质性较慢速，并蓬勃发展为发病的1DF高血压。我们之前刻画了一三组在首次样品到多种呼吸道自身血清结果显示后至少10年无高血压的很慢速实质性者，这三组患儿人数少，但相似性非常具体。随后，我们发现呼吸道自身肝细胞特异性CD8+T细胞核反应会在实质性减慢速的患儿中会前提不不存在，但在近期发病和长年不存在的高血压患儿中会很难以样品到。这显然指出，与实质性患儿相比较，这些患儿性疾病反应会的通气增强。

最初深入研究指出，尽管通气性T细胞核(Treg)数量正常，但高血压患儿不存在一些功用缺陷，其中会有数对IL-2的反应会灵活性增大。此外，高血压患儿中会的物理现象CD4+T细胞核显然对通气突显抵抗性，表现为物理现象T细胞核的抑止增强，自然造成了的Treg和活体造成了的抑止Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞核中会IL-2反应会增强。本深入研究的目的是刻画了CD4+通气性T细胞核(Treg)在一小群极减慢速实质性者中会的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以社会阶层系统化的纵向深入研究，在21岁以下胃癌的患儿亲属中会检查1DF高血压的危险环境因素。我们之前刻画了长年减慢速实质性者的相似性，他们依然多重呼吸道自身血清阴性有约10年，但并未注意到高血压的诊疗病征，慢速性或非开展性性疾病。随后，10名继续依然无高血压并愿意提供大量血液结果显示的减慢速实质性者归属于T和B细胞核功用研究。在现阶段的深入研究中会，8名慢速实质性者(SP三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的呼吸道自身血清阴性。所有的与会者都处于1DF高血压实质性的1期，尽管一些人随后挽回了呼吸道自身血清对某些肝细胞的阴性反应会，然而，一名患儿已经处于2期至少6年，但并未注意到诊疗病征，一名患儿被诊疗为高血压，该病患72岁，在搜集实验结果显示时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中会对该NADP开展了单独评核。转化外周血单个核细胞核(PBMCs)，引入多数值流式细胞核忍术和T细胞核抑止试验评核NADP中会Treg的频百余人、表DF和功用。适用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)开展无指派聚类研究，评核Treg表DF。

结果：与健康NADP相比较，来自慢速实质性体的梦境CD4+T细胞核的指派聚类标示出，激活的梦境CD4+ Treg频百余人提高，与组胺抑止的TNFR相关蛋白(GITR)解读提高有关。一名HbA1c下降时的患儿与实质性减慢速者和匹配的对照三组相比较，Treg谱有所各不相同。功用研究指出，与健康NADP相比较，来自减慢速实质性体的Treg抑制的CD4+物理现象T细胞核抑止明显损毁。表现为对物理现象CD4+T细胞核CD25和CD134解读的抑止提高。

上图1 深入的表DF研究标示出，CD4+Treg亚DF在慢速实质性缓冲区中会提高。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物解读认定出10个元簇:梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg上标转化成的10个元簇的MST。每个链表推选一个协同(100个协同)，大得多的元协同(10个元协同)在链表三组周围着色。每个链表中会的年糕上图透露单个上标的解读档次。(b)每个元聚类的热上图，以标示出整体上标解读。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)转化成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)比起稀土元素为每个metacluster装有曲终点站上图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞核(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞核(l)。绿色带弟推选人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩鉴定。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模DF证实，Treg频百余人的提高是实质性减慢速的logo。基准离弟通道(a - f)和柑橘研究(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)表DFCD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的推选性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR解读开展转化，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)三组以及NADPSP 606(绿色)中会CD25+ cd127的频百余人综合上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离弟通道弟集的装有曲终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读气压纹理，箭头突出的簇被识别为SP和HD缓冲区彼此间的各不相同。(j)装有曲终点站上图标示出了在SP(黑斑)和HD(灰点)三组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起稀土元素(比百余人)。(k)直方上图标示出每个簇的表DF(粉红色)和Treg上标比起解读与氛围解读(绿色);上列，缓存Treg_3;示意上图一行，缓存Treg_4。氛围与所有其他簇中会上标的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩鉴定

上图3 与健康献血者相比较，实质性减慢速者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T细胞核元簇(梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的解读热上图(sp606不有数在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(蓝灰色)、所有SP(绿色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读串联，标示出直方上图(c)和综合上图(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和鉴定，p< 0.07(绿色)所有NADP有数，p< 0.05(绿色)NADPSP 606和匹配的HD不有数在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从基准离弟通道，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(绿色)和SP 606(绿色)串联，标示出直方上图(e)和综合上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩鉴定

上图4 来自减慢速实质性的CD4+ treg细胞核控制物理现象CD4+T细胞核的灵活性增大。SP三组用绿色的终点站和带弟透露，HD三组用白色的终点站和带弟透露，绿色的终点站/带弟透露NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上标为CFSE, Treg按掩蔽的比百余人氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠抑止细胞核，人才培养3翌日开展流式细胞核忍术样品。(a-d)与CD4+反之亦然者比起应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。适用阴性对照(激活的响应细胞核分别为treg)近似值抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 物理现象CD4+T细胞核对减慢速实质性的T细胞核抑止的抑止来得敏感。SP三组用绿色的终点站和带弟透露，HD三组用白色的终点站和带弟透露，绿色的终点站/带弟透露NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上标，treg按掩蔽的比百余人氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠抑止细胞核，人才培养3翌日开展流式细胞核忍术(CD25反染)和细胞核因弟研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢速实质性弟的抑止梦境CD4+Treg在GITR解读中会得到了扩展和珍贵，强调了必要性深入研究Treg在1DF高血压风险社会阶层中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28