Diabetologia：激活但功能受损的清醒Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来肝细胞自身血清到显现出来1改进型心血管疾病临床呕吐的方面部将在学龄前时期就有很好的揭示，多个肝细胞自身血清HIV的学龄前中所有70%在血清切换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的学龄前这一%减少到84%。相对来说之下，九成临床1改进型心血管疾病一半以上的改进型1改进型心血管疾病的肺癌机制还从未得到确实的科学研究。

愈发多的人开始用于再行的系统来定义1改进型心血管疾病的方面：性状在显现出来多种肝细胞自身血清时进入第1过渡阶段，显现出来血糖诱发时进入第2过渡阶段，显现出来呕吐时进入第3过渡阶段。一些多发肝细胞自身血清HIV的性状，在1期和2期，方面较快，并其发展为肺癌的1改进型心血管疾病。我们之前揭示了一小组在首次测定到多种肝细胞自身血清取样后至少10年无心血管疾病的极快方面者，这小组病患人数少，但特质非常完全一致。随后，我们注意到肝细胞自身复合物特异性CD8+T细胞会自由基在方面减快的病患中所基本不共存，但在最近肺癌和长期共存的心血管疾病病患中所很容易测定到。这似乎说明了，与方面病患相对来说，这些病患神经性自由基的平衡增强。

早期科学研究说明了，尽管平衡性T细胞会(Treg)数量正常，但心血管疾病病患共存一些动态缺陷，其中所有数对IL-2的自由基能力降低。此外，心血管疾病病患中所的现象CD4+T细胞会似乎对平衡更具抵抗性，表现为现象T细胞会的选择性减弱，自然地激发的Treg和粘液激发的诱导Treg，以及复合物随之而来的CD4+T细胞会中所IL-2自由基减弱。本科学研究的目的是揭示了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在一小群极减快方面者中所的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病患亲属中所检查1改进型心血管疾病的危险因素。我们之前揭示了长期减快方面者的特质，他们保持多重肝细胞自身血清HIV超过10年，但从未显现出来心血管疾病的临床呕吐，快性或非进行性神经性。随后，10名继续保持无心血管疾病并愿意提供大量尿液取样的减快方面者设为T和B细胞会动态归纳。在目前的科学研究中所，8名快方面者(SP小组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身血清HIV。所有的与会者都保持稳定1改进型心血管疾病方面的1期，尽管一些人随后耗尽了肝细胞自身血清对某些复合物的HIV自由基，然而，一名病患已经保持稳定2期至少6年，但从未显现出来临床呕吐，一名病患被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在统计学中所对该遗传物质进行了单独指标。剥离外周血单个氢细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会心法和T细胞会选择性试验指标遗传物质中所Treg的高频部将、表改进型和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和重返)进行无监理聚类归纳，指标Treg表改进型。

结果：与健康遗传物质相对来说，来自快方面体的梦境CD4+T细胞会的监理聚类结果显示，酪氨酸的梦境CD4+ Treg高频部将减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减少有关。一名HbA1c下降的病患与方面减快者和比如说的印证小组相对来说，Treg明人有所有所不同。动态归纳说明了，与健康遗传物质相对来说，来自减快方面体的Treg抑制的CD4+现象T细胞会选择性明显毁坏。表现为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134隐含的选择性减少。

布1 的系统地的表改进型归纳结果显示，CD4+Treg亚改进型在快方面描述符中所减少。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标识物隐含深入研究出10个元簇:梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个有所不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在键值小组周边上色。每个键值中所的饼布指出单个标识的隐含高级别。(b)每个元聚类的热布，以结果显示连续性标识隐含。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)相对核素为每个metacluster箱内新线布(核素> 0.05%)确定为HD和SP小组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞会(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞会(l)。橘色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg高频部将的减少是方面减快的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP与会者和比如说的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的特色布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含进行剥离，精心设计FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及遗传物质SP 606(橘色)中所CD25+ cd127的高频部将汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱内新线布;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含数值着色，箭头醒目的簇被识别为SP和HD描述符之间的有所不同。(j)箱内新线布结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对核素(%)。(k)直方布结果显示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标识相对隐含与剧中隐含(红色);上列，闪存Treg_3;下面偷偷地，闪存Treg_4。剧中与所有其他簇中所标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

布3 与健康献血者相对来说，方面减快者梦境treg的GITR减少。每个梦境CD4+T细胞会元簇(梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个隐含标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的隐含热布(sp606不有数在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(橘色)所有遗传物质有数，p< 0.05(红色)遗传物质SP 606和比如说的HD不有数在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR隐含，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)串联，结果显示直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

布4 来自减快方面的CD4+ treg细胞会控制现象CD4+T细胞会的能力降低。SP小组用红色的新线和白点指出，HD小组用金色的新线和白点指出，橘色的新线/白点指出遗传物质sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，培植3天后进行流式细胞会心法测定。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg培植(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性平均值。用于HIV印证(酪氨酸的拥护细胞会包含treg)计算选择性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现象CD4+T细胞会对减快方面的T细胞会活化的选择性更敏感。SP小组用红色的新线和白点指出，HD小组用金色的新线和白点指出，橘色的新线/白点指出遗传物质sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，培植3天后进行流式细胞会心法(CD25反染)和细胞会因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分部将(b)。(c,d) CD25选择性百分部将(c)和CD134选择性百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减快方面子的活化梦境CD4+Treg在GITR隐含中所得到了扩展和丰富，强调了全面性科学研究Treg在1改进型心血管疾病安全性性状中所的表型的必要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28